基因工程

基因工程

图书基本信息
出版时间:2003-8
出版社:華南理工大
作者:楊汝德
页数:230
书名:基因工程
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基因工程
内容概要
  《基因工程》論述了基因工程技術的基本原理和基因工程在生物制藥中的研究和應用。《基因工程》內容包括基因工程概述,基因工程中常用的工具黴,基因工程常用的基因克隆載體,目的基因的制取,目的基因與克隆載體的體外重組,重組克隆載體引入受體細胞,含目的基因重組體的篩選、鑒定與分析,目的基因在宿主細胞中的表達,無性繁殖系的組建,基因工程藥物的生產和基因工程藥物的檢驗等。  《基因工程》在內容上除了對有關基因工程基本原理部分的論述外,還詳細介紹了基因工程在生物制藥領域的研究和應用。《基因工程》既適合于作為生物工程、生物技術、生物制藥和相關專業本科生的教材,也適合于作為發酵工程、生物化工專業碩士研究生的教材,同時也可供從事生物技術工作的人員參考。 
书籍目录
1  基因工程概述1.1  基因工程概貌1.1.1  基因工程的誕生和興起1.1.2  基因工程的特點與基本步驟1.1.3  基因工程早期的開創性研究成就1.2  基因工程技術的應用與發展趨勢1.2.1  全球性的基因工程爭奪戰1.2.2  蛋白質工程的研究開發飛速發展1.2.3  轉基因動植物生產藥物的研究迅速崛起1.2.4  醫學科學研究取得巨大成就1.2.5  基因治療技術取得重大進展1.2.6  規模空前的國際《人類基因組計劃》提前完成1.3  基因工程與生物制藥1.3.1  基因工程制藥發展態勢1.3.2  主要基因工程藥物簡介2  基因工程常用的工具黴2.1  限制性核酸內切黴2.1.1  限制黴的發現2.1.2  限制黴的種類2.1.3  限制黴的命名2.1.4  Ⅱ型限制黴的特性2.1.5  限制片段末端連接2.2  DNA連接黴2.2.1  DNA連接黴連接作用的特點2.2.2  基因工程中常用的連接黴2.2.3  DNA連接黴連接作用的分子機理2.3  DNA聚合黴2.3.1  大腸桿菌DNA聚合黴Ⅰ2.3.2  K1enow大片段黴2.3.3  T4噬茵體DNAR聚合黴2.3.4  經修飾的T7噬茵體DNA聚合黴2.3.5  TaqDNA聚合黴及Ampli TaqTMDNA聚合黴2.3.6  反轉錄黴2.4  DNA修飾黴2.4.1  末端脫氧核 酸轉移黴2.4.2  堿性磷酸黴2.4.3  T4噬菌體多核 酸激黴2.5  單鏈核酸內切黴2.5.1  Sl核酸黴2.5.2  Bal31核酸黴2.6核酸外切黴2.6.1  核酸外切黴Ⅶ2.6.2  核酸外切黴Ⅲ2.6.3  λ核酸外切黴3  基因工程常用的克隆載體3.1  質粒載體3.1.1  質粒概述3.1.2  質粒DNA分子的特性3.1.3  質粒載體的改造和構建3.1.4  DBR322質粒載體3.1.5  DUC質粒載體3.1.6  其他重要的質粒載體3.2  λ噬菌體載體3.2.1  λ噬菌體的基本特性3.2.2  λ噬菌體基因組的結構與功能3.2.3  λ噬菌體載體的構建3.2.4  常用的λ噬菌體載體3.2.5  改良型λ噬菌體載體3.3  粘粒載體3.3.1  粘粒載體的構建3.3.2  粘粒載體的特點3.3.3  常用的粘粒載體3.4  M13噬菌體載體3.4.1  M13噬菌體的基本特性3.4.2  M13噬菌體載體的構建3.4.3  M13噬茵體載體系列的優點3.5  噬菌粒載體3.5.1  pUC118和pUCll9噬菌粒載體3.5.2  pBluescript噬菌粒載體3.6  哺乳動物細胞載體系統3.6.1  SV40載體3.6.2  牛乳頭瘤病毒(BPV)載體3.6.3  EBV病毒載體4目的基因的制取4.1  目的基因的化學合成4.1.1  目的基因的設計4.1.2  寡聚核 酸片段的合成4.1.3  寡核 酸片段的分離和純化4.1.4  用寡核 酸片段組裝目的基因4.1.5  化學合成寡核 酸的其他用途4.2  構建基因文庫法分離目的基因4.2.1  構建基因文庫法分離目的基因的基本步驟4.2.2  真核基因組DNA文庫的構建過程4.3  黴促合成法制取目的基因4.3.1  真核生物細胞中的mRNA4.3.2  從構建的cDNA文庫中篩選目的cDNA4.3.3  RT-PCR法合成目的cDNA5  目的基因與克隆載體的體外重組5.1  目的基因與質粒載體的連接5.1.1  粘性末端連接法5.1.2  定向克隆法5.1.3  平末端連接法5.1.4  同聚物加尾法5.1.5  加人工接頭連接法5.1.6  加DNA餃接物連接法5.1.7  其他轉換末端形式連接法5.2  目的基因與入噬菌體載體的連接5.2.1  λ噬茵體載體臂DNA的制備5.2.2  λ噬菌體載體臂與外源目的DNA片段的連接6  重組克隆載體引入受體細胞6.1  基因工程受體細胞6.1.1  受體細胞的特性6.1.2  重組體分子導入受體細胞的途徑6.2  重組體DNA分子的轉化或轉染6.2.1  用氯化鈣制備新鮮的感受態細胞轉化法6.2.2  用復合劑制備感受態細胞轉化法6.2.3  高壓電穿孔轉化法(電轉化法)6.3  重組λ噬菌體DNA的體外包裝與轉導6.3.1  λ噬茵體體外包裝的基本原理6.3.2  λ噬菌體DNA的體外包裝6.3.3  包裝提取物的制備6.3.4  重組λDNA的體外包裝與感染方法6.4  重組克隆載體導人哺乳動物細胞的轉染6.4.1  磷酸鈣和DNA共沉澱物轉染法6.4.2  DEAE-葡聚糖介導轉染法6.4.3  利用Polybrene(聚季銨鹽)的DNA轉染法6.4.4  利用原生質體融合的DNA轉染法6.4.5  電穿孔法DNA轉染7  含目的基因重組體的篩選、鑒定與分析7.1  重組體(菌)的篩選7.1.1  抗生素抗性基因插入失活法7.1.2  β-半乳糖 黴基因插入失活法7.1.3  快速細胞破碎與凝膠電泳篩選法7.1.4  放射性標記核酸探針雜交篩選法7.1.5  免疫化學篩選法7.2  重組體的鑒定7.2.1  黴切及凝膠電泳鑒定法7.2.2  Southern印跡雜交法7.2.3  電鏡R-環檢測法7.2.4  基因產物鑒定法7.3  重組DNA的序列分析7.3.1  sanger-雙脫氧鏈終止法DNA測序7.3.2  Maxam-Gilbert化學修飾法DNA測序7.3.3  快速自動化DNA測序8  目的基因在宿主細胞中的表達8.1  外源目的基因在原核細胞中的表達8.1.1  原核基因表達載體的構成8.1.2  常見的原核細胞表達載體系統8.1.3  外源目的基因在原核細胞的表達形式8.1.4  在原核細胞中高效表達目的基因8.1.5  基因定點誘變技術8.2  外源目的基因在真核細胞中的表達8.2.1  真核細胞表達載體的功能元件8.2.2  酵母茵表達系統8.2.3  哺乳動物細胞表達系統9  基因工程藥物無性繁殖系的組建9.1  人胰島素原融合蛋白重組菌的組建9.1.1  重組表達質粒pJG202的構建與鑒定9.1.2  重組質粒pJG202在大腸桿菌中的表達9.1.3  融合蛋白後處理成為人胰島素原9.2  人a2b型干擾素工程菌的組建9.2.1  hIFN-a2b基因的獲得9.2.2  重組表達質粒pMZI2B的構建9.2.3  人a2b型干擾素工程菌的形成與基因的表達9.3  集落刺激因子工程菌的組建9.3.1  細胞總RNA的提取9.3.2  PCR引物的設計與合成9.3.3  RT-PCR法制備GM-CSF cDNA9.3.4  GM-CSF重組表達載體與工程菌的組建9.4  白細胞介素融合蛋白工程菌的組建9.4.1  質粒與PCR引物9.4.2  人IL-2 cDNA和PE基因的末端改造9.4.3  IL2-PE-pLY5重組質粒的構建9.5  乙型肝炎表面抗原重組酵母的組建9.5.1  BsAg基因重組表達質粒pLS1和pLS2的構建9.5.2  重組表達質粒的轉化及HBsAg的表達9.5.3  重組表達質粒在酵母細胞中的穩定性9.6  人組織型縴溶黴原激活劑細胞株的組建9.6.1  真核表達質粒pLFrGGI的構建9.6.2  高效表達FrGGI(tPA突變體)的CHO細胞株的獲得9.6.3  去除dhfr基因轉錄增強子的作用9.7  紅細胞生成素CHO細胞株的組建9.7.1  質粒與細胞株9.7.2  EPO真核重組表達質粒pMGL4的構建9.7.3  重組表達質粒轉染COS-7細胞及產物表達9.7.4  重組表達質粒轉染CHO-dhfr-細胞及EPO表達9.8  人腫瘤壞死因子昆蟲細胞株的組建9.8.1  含hTNF-a基因的重組質粒的構建9.8.2  共轉染與重組病毒的獲得9.8.3  重組病毒感染Sf2l細胞及hTNF-a的表達10  基因工程藥物的生產10.1  基因工程菌(細胞)的培養與發酵10.1.1  工程細菌的培養與發酵10.1.2  工程酵母的培養與發酵10.1.3  工程細胞的培養與發酵10.2  基因工程藥物的分離純化10.2.1  影響分離純化工藝設計的主要因素10.2.2  各種產物表達形式采用的分離純化方法10.3  基因工程藥物的分離純化實例10.3.1  以包涵體形式表達的rGM-CSF中試分離純化10.3.2  以分泌型表達的人a1-干擾素的分離純化10.3.3  以可溶性形式表達的rhG-CSF的分離純化10.3.4  在酵母中表達的HBsAg的分離純化11  基因工程藥物的檢驗11.1  基因工程藥物的質量控制11.1.1  主要的基因工程藥物11.1.2  基因工程藥物的特點11.1.3  基因工程藥物的質量要求11.1.4  基因工程藥物的質控要點11.1.5  基因工程藥物的制造及檢定規程11.2  基因工程藥物常用的檢驗方法11.2.1  化學檢定法11.2.2   圖分析法11.2.3  外源性DNA殘留量的測定11.2.4  宿主細胞蛋白雜質的檢測11.2.5  無菌試驗11.2.6  內毒素試驗11.2.7  異常毒性試驗11.2.8  熱原質試驗11.2.9  生物學活性(效價)檢定11.3  主要基因工程藥物的檢驗11.3.1  重組人胰島素的檢驗11.3.2  重組人生長激素的檢驗11.3.3  重組人干擾素的檢驗11.3.4  重組人白細胞介素的檢驗11.3.5  重組人紅細胞生成素的檢驗11.3.6  重組人集落刺激因子的檢驗11.3.7  重組人組織型縴溶黴原激活劑的檢驗11.3.8  重組人腫瘤壞死因子的檢驗11.3.9  重組乙型肝炎疫苗的檢驗附錄參考文獻
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